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當(dāng)前位置：KTIMES TECHNOLOGY LIMITED>>生物成像系統(tǒng)>>細(xì)胞成像>> isoPick（iotaSciences）可視化單細(xì)胞分選系統(tǒng)
可視化單細(xì)胞分選系統(tǒng)
基于GRID技術(shù)、高通量、高自動(dòng)化的單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)。isoPick采用微射流技術(shù)，利用界面張力對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基（或干細(xì)胞涂層）進(jìn)行重塑，在培養(yǎng)皿上雕刻出單獨(dú)的細(xì)胞腔室GRID。isoPick可以在 6 厘米培養(yǎng)皿上創(chuàng)建 256 個(gè)單細(xì)胞腔室GRID陣列，并將細(xì)胞以納升體積全自動(dòng)地分配到各個(gè) GRID 單細(xì)胞腔室中，通過(guò)isoPick的光學(xué)顯微鏡可以清楚地看到 GRID 室中的單細(xì)胞?；贕RID技術(shù)和光學(xué)成像信息，isoPick可以確保分選出的細(xì)胞100%為單細(xì)胞
特點(diǎn)
- 全自動(dòng)化流程
- 操作簡(jiǎn)單，對(duì)細(xì)胞無(wú)損傷
- 結(jié)果可追蹤
- 分離效率高達(dá)100%
- 直接轉(zhuǎn)移到PCR管或96孔板
- 結(jié)構(gòu)緊湊，體積小
優(yōu)勢(shì)：
傳統(tǒng)單細(xì)胞分離手段無(wú)法保證所得的樣品內(nèi)只有一個(gè)單細(xì)胞，有可能有多個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)，導(dǎo)致下游的實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)誤差。
采用的GRID技術(shù)結(jié)合圖像信息分析，結(jié)果可追蹤，保證100%準(zhǔn)確的單細(xì)胞分選。
而且isoPick分選條件溫和，可以顯著提高分選單細(xì)胞的存活率。
同時(shí)isoPick可將單細(xì)胞樣品按照特定的體積直接轉(zhuǎn)移到96孔板或PCR管中，無(wú)縫銜接單細(xì)胞下游應(yīng)用，確保后續(xù)單細(xì)胞組學(xué)信息完整性。
單細(xì)胞分選 | 單細(xì)胞克隆 | 單細(xì)胞組學(xué) | |
100%準(zhǔn)確的單細(xì)胞分選效率 | 顯著提升單細(xì)胞克隆的存活率（單克隆率） | 極大地簡(jiǎn)化單細(xì)胞組學(xué)步驟 | |
技術(shù)優(yōu)勢(shì) | 傳統(tǒng)單細(xì)胞分選方法無(wú)法保證所得的樣品中只有一個(gè)單細(xì)胞，而isoPick采用GRID單細(xì)胞腔室分離與光學(xué)信號(hào)驗(yàn)證相結(jié)合的分選技術(shù)，能夠保證分選所得的單細(xì)胞樣品中只有一個(gè)單細(xì)胞。 | isoPick可以高效分離hiPSCs單細(xì)胞，用于構(gòu)建單克隆細(xì)胞系。isoPick對(duì)敏感單細(xì)胞處理溫和，能夠確保更高的單細(xì)胞存活率，達(dá)到更佳的克隆生長(zhǎng)效果。 | isoPick可以將1.5~200 µl的單細(xì)胞樣品直接轉(zhuǎn)移至PCR管帶或96孔板中，無(wú)縫銜接后續(xù)單細(xì)胞測(cè)序scWGA流程，極大地簡(jiǎn)化單細(xì)胞組學(xué)步驟。 |
單細(xì)胞分選前后的GRID細(xì)胞腔室 |
包被不同基質(zhì)的96孔板的單細(xì)胞hiPSC集落 |
單細(xì)胞的WGA結(jié)果 |
可視化單細(xì)胞分選系統(tǒng)
人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)的單細(xì)胞克隆
人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)構(gòu)建單克隆細(xì)胞系培養(yǎng)步驟繁瑣，細(xì)胞對(duì)異常的處理和操作非常敏感，
傳統(tǒng)單細(xì)胞分選容易導(dǎo)致細(xì)胞和遺傳毒性應(yīng)激的積累，進(jìn)而導(dǎo)致不良分化和多能性喪失。
使用isoPick可以溫和、自動(dòng)地將人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)進(jìn)行單細(xì)胞分選，以高效率培養(yǎng)hiPSCs單克隆細(xì)胞系，顯著提高了細(xì)胞分離與克隆效率。
K562細(xì)胞單細(xì)胞測(cè)序
傳統(tǒng)單細(xì)胞測(cè)序需對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行全基因組擴(kuò)增（WGA），但傳統(tǒng)單細(xì)胞WGA受限于如何獲得單個(gè)細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到小體積的WGA反應(yīng)中。
使用isoPick自動(dòng)將K562細(xì)胞拾取并轉(zhuǎn)移至含3.5 µl scWGA試劑的PCR管中，并無(wú)縫銜接scWGA反應(yīng)。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示（下圖），單細(xì)胞WGA的DNA樣本(+)中兩種基因均被特異性擴(kuò)增，而陰性對(duì)照(-)沒(méi)有這兩種擴(kuò)增產(chǎn)物，符合預(yù)期。
Prime 編輯使用與逆轉(zhuǎn)錄酶融合的 Cas9 切口酶，將 DNA 序列從“Prime 編輯"引導(dǎo) RNA (pegRNA) 復(fù)制到特定基因座。通過(guò)Prime 編輯將多XI環(huán)素誘導(dǎo)型 Prime Editor 蛋白 (PE2) 整合到 iPSC 細(xì)胞系的AAVS1 基因組，之后使用isoPick分選轉(zhuǎn)入靶基因的hiPSCs細(xì)胞系，以確保細(xì)胞的單克隆性。（見(jiàn)上圖）
膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）通過(guò)表觀遺傳免疫編輯獲得骨髓相關(guān)轉(zhuǎn)錄程序以引發(fā)免疫逃逸
研究人員通過(guò)將多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞 (GSC) 連續(xù)移植到免疫活性宿主中，發(fā)現(xiàn) GSC 通過(guò)建立增強(qiáng)的免疫抑制腫瘤微環(huán)境來(lái)免疫逃逸。從機(jī)制上講，GSC通過(guò)表觀遺傳免疫編輯過(guò)程引起，其在免疫攻擊后強(qiáng)制執(zhí)行 GSC 中穩(wěn)定的轉(zhuǎn)錄和表觀遺傳變化。研究中使用Irf8敲除細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)證明，Irf8的激活是細(xì)胞免疫逃逸的一個(gè)重要因素，且在體內(nèi)可能通過(guò)IFNγ介導(dǎo)的激活發(fā)生。該研究使用isoPick構(gòu)建Irf8克隆敲除系
